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澳门新莆京app官网网站生物推出外泌体提取、检测、鉴定与多功能标记服务——TEM、NTA、WB与标记

外泌体是一类直径在30-150 nm的细胞外囊泡,具有丰富的可检测靶标(蛋白质,DNA,RNA,脂质等)且非常稳定,可以作为细胞间信号转导的载体。外泌体不仅参与了细胞间通信,也影响了肿瘤的生长和转移,肿瘤微环境的改变,免疫调节等,在人类健康和疾病的许多方面起着重要作用。

图1 外泌体从宿主细胞中释放并被受体细胞摄取。外泌体是宿主细胞中产生的多泡小体与细胞膜融合并释放到细胞外的小囊泡,可通过与细胞膜融合(a)或被胞吞(b)进入受体细胞【1】

外泌体提取常用的样本包括细胞培养上清及各种体液(血液、尿液等),针对这些样本发展起来的分离技术主要有:超速离心法、密度梯度离心法、超滤法、免疫磁珠法、沉淀法等,每种方法各有优缺点,如超速离心和密度梯度离心法提取的外泌体纯度较高,是现有提取方法的“金标准”,但离心设备贵且样本起始量大;而沉淀法虽可获得较多外泌体,但受杂蛋白影响,纯度较低。具体实验中应使用哪种提取方法,需要实验者根据实验条件及实验目的进行确定。

无论哪种外泌体分离方法都很难完全将外泌体与其他囊泡或大分子蛋白质复合体或其他杂质区分开,获得十分纯净而且单一的外泌体样品,因此就需要证明分离得到的产物是否是外泌体,即对外泌体进行鉴定。2014年国际细胞外囊泡协会(胞外囊泡和外泌体研究领域的研究者和科学家组成的专业社会团体,是胞外囊泡研究领域最权威的学会之一)提出了外泌体实验必须要做的最少实验要求,并于2018年进行了更新修改,即目前的《MISEV 2018》。

关于鉴定方法,除了利用透射电镜(TEM)鉴定形态、粒径分析(Nanosight)鉴定粒径分布和浓度之外,还要结合Western Blot检测囊泡上的标志性蛋白,三者缺一不可。与14年版相比,《MISEV 2018》在检测标志蛋白方面提出了更详细的建议,需同时检测待测囊泡不同类型的蛋白,如跨膜蛋白(CD9、CD63、CD81等)、膜结合蛋白(TSG101、ALIX、HSP70等),同时强调了阴性对照在检测外泌体样本中的重要性【2】。

澳门新莆京app官网网站生物拥有成熟的外泌体鉴定和检测技术平台,设备齐全,人员专业,可以为客户提供以下常规技术服务与特色标记服务。


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